Количественное определение ГМО

♦♦♦

"Для количественного определения ГМИ в пищевых продуктах, растительном сырье, продуктах его переработки и т. д. в мировои и отечественнои практике, как правило, используют тест-системы, основанные на методе ПЦР с детекцией результатов амплификации «в реальном времени>), предусматривающие определение содержания чужеродной ДНК относительно геномной ДНК растений.
[Holst-Jensen et al, 2003; Ronning etal, 2003].
В состав подобных систем входит амплификационная часть, калибровочные образцы и специальное программное обеспечение, позволяющее производить обработку получаемых в эксперименте данных.

Амплификациониая часть включает систему праймеров и флуоресцентио-меченых проб для ПЦР·амплификации чужеродной ДНК (например, фрагмента промотора 35S, трансформационного события и т. д.) и нормировочной ДНК (например, участок какого-либо уникального гена растения) в одной пробирке. Гибридизационные пробы для чужеродной и нормировочной ДНК несут различные флуоресцентные метки (например, FAM и НЕХ соответственно), что позволяет получить пороговые значения циклов амплификации (Ct) отдельно для чужеродной и нормировочной ДНК.
Для интерпретации результатов, полученных с помощью ПЦР "в реальном времени", применяют метод относительного количественного определения (метод сравнения пороговых циклов).

Расчет содержания чужеродной ДНК относительно нормировочной производят с использованием калибровочной прямой, строящейся на основании тестирования калибровочных образцов с известным соотношением чужеродной и нормировочной ДНК (например, 0 ,1 % , 1 % и 5% ), проводимого одновременно с исследуемыми образцами. Калибровочную прямую строят следующим образом: по оси Х откладывают лсt, по оси
У откладывают десятичный логарифм процентного содержания чужеродной ДНК относительно нормировочной ДНК.

Необходимо отметить, что описанный подход позволяет определить, например, соотношение ГМ сои и немодифицированной сои в пищевом продукте, но не содержание ГМИ в общей массе продукта. Исключением является определение содержания ГМИ в гомогенных продуктах переработки растений, таких как мука или крупа. В этом случае соотношение чужеродной и нормировочной ДНК будет соответствовать соотношению массы муки (крупы) полученной из растений ГМ линии несущей данный целевой ген и известной общей массы муки (крупы).
Например, результат «обнаружена ДНК сои линии 40-3-2 в количестве 10% относительно геномной ДНК сои в случае образца "100 мг соевой муки", будет свидетельствовать о том, что в данном образце содержится 10 мг муки из бобов сои линии 40-3-2.
В то же врем.я, подобный результат, полученный для колбасных изделий, свидетельствует лишь о том, что в данном образце обнаружено некоторое количество сои, 10% от которой составляет ГМ соя линии 40-3-2, при этом количество сои в колбасе
в результате данного исследования установить нельзя". ♦♦♦

{ПЦР "в реальном времени", Под редакцией д-ра биол. наук Д. В. Ребрикова, 2009 г.}