Наследственные Заболевания КРС.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУСНОЙ НАГРУЗКИ

Полимеразная цепная реакция в диагностике инфекцион­ных заболеваний уверенно приближается к званию "золотого стандарта",
появление ПЦР "в реальном времени" сущест­венно ускорило это движение, исключив ряд недостатков клас­сической методики
с детекцией результатов после реакции.
Развитие технологий амплификации ДНК произвело рево­люцию в клинической вирусологии, позволив быстро, точно и достаточно
просто определять наличие вирусов в образце как качественно, так и количественно, и использовать полученные результаты в
клинической практике при лечении больных. Ко­личественное определение вирусов очень важно при острых и персистирующих инфекциях,
для которых простая детекция вируса не дает всей необходимой информации о течении болез­ни и ходе лечения.
Появление методов количественной оценки вирусной нагрузки позволило врачам следить за эффектом ан­тивирусной терапии и
возникновением подтипов, устойчивых к антивирусным агентам. Более того, на основе измерения вирус­ной нагрузки можно делать прогноз
прогрессии заболевания, что позволяет врачам начинать лечение в доклинической фазе болезни (так называемая упреждающая терапия). 
Несмотря на то, что к настоящему времени разработан ши­рокий спектр методов для определения количества вирусных частиц, 
ПЦР по-прежнему является основной технологией, используемой как в исследовательских, так и в клинических лабораториях.

Организация эксперимента 

Процесс количественного определения вирусной РНК или ДНК методом ПЦР так же, как и любое другое ПЦР исследова­ние, включает три этапа. 
1. Пробоподrотовка.
2. Амплификация.
3. Детекция (для метода ПЦР  "в реальном времени" этап детекции совмещен с этапом амплификации).

ПЦР "в реальном времени", как инструмент для исследо­вания вирусной нагрузки, является привлекательной не толь­ко ввиду
широкого динамического диапазона, позволяющего избежать разбавления ампликонов перед детекцией и повторе­ния экспериментов
из-за выпадения результатов из допустимо­го интервала, но и ввиду ее низкой внутриэкспериментальной и межэкспериментальной
изменчивости, а также равной или даже более высокой чувствительности по сравнению с традиционной вирусной культурой, обычной ПЦР
в один раунд или гнездовой ПЦР (nested-ПЦP, реакция с использованием праймеров, ле­жащих внутри ранее амплифицированного фрагмента ДНК).
Было показано, что ПЦР «в реальном времени» имеет, как ми­нимум, такую же чувствительность, как и Саузерн-блот гибридизация,
которая многими учеными считается "золотым стандартом»"для гибридизационных методов.­